Anales Cientícos, 79 (2): 346 - 352 (2018)
ISSN 2519-7398 (Versión electrónica)
DOI: http://dx.doi.org/10.21704/ac.v79i2.1245
Website: http://revistas.lamolina.edu.pe/index.php/acu/index
© Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima - Perú
Presentado: 18/03/2018
Aceptado: 12/12/2018
Uso de inductores de defensa en la prevención de infecciones ocasionadas por
Lasiodiplodia theobromae, en plantones de vid (Vitis vinifera) en Perú
Use of defense inductors in the prevention of infections caused by Lasiodiplodia theobromae, in vine plant
(Vitis vinifera) in Peru
Jose Miguel Soto Heredia
1
* & Carlos Alberto Cadenas Giraldo
2
*Autor de correspondencia
Resumen
El objetivo del presente trabajo de investigación fue evaluar el efecto de seis sustancias químicas (Ácido fosforoso,
fosetil aluminio, fosto de potasio, sulfato de cobre pentahidratado, mananos oligosacáridos, acibenzolar-S-metil) y
dos agentes biológicos (Bacillus subtilis y Trichoderma harzianum), en la prevención de Lasiodiplodia theobromae,
utilizados como inductores de defensas en plantas de vid “Red Globe” injertados sobre patrón Harmony. Los tratamientos
fueron aplicados de manera preventiva, se realizaron tres aplicaciones foliares de los productos con intervalos de diez días
entre aplicación, posteriormente 5 días después de la última aplicación fueron inoculadas con micelio de L. theobromae,
tanto en la variedad como en el patrón mediante una herida. Las evaluaciones se realizaron a los 40 días después de la
inoculación y se consideró tanto la incidencia y el área de las lesiones necróticas presentes. Para la incidencia se calculó
el número de plantas con lesiones necróticas y para el área de infección se utilizó el programa de análisis de imagen
ASSESS 9.1 para determinar el área de la lesión (cm
2
). Para el análisis estadístico se utilizó un diseño completamente al
azar (DCA), una comparación de media Tukey con un nivel de signicancia del 95 % (α= 0,05). Los mejores resultados
se obtuvieron con los tratamientos con menores porcentajes de incidencia: Mananos oligosacáridos, acibenzolar-S-metil
y fosetil de aluminio, los cuales mostraron se ecaces en la prevención de la enfermedad ocasionada por L. theobromae.
Palabras clave: Acibenzolar-S-metil; Red Globe; muerte regresiva; inductores de defensa; mananos oligosacaridos.
Abstract
The objective of this research work was to evaluate the effect of six chemical substances (phosphorous acid, aluminum
fosetyl, potassium phosphite, copper sulfate pentahydrate, mannans oligosaccharides, acibenzolar-S-metil) and two
biological agents (Bacillus subtilis and Trichoderma harzianum), in the prevention of Lasiodiplodia theobromae, used as
defense inducers in grape plants “Red Globe” grafted onto ‘Harmony’ rootstock were used. The treatments were applied
in a preventive way, three foliar applications of the products were made with intervals of ten days between application,
later 5 days after the last application they were inoculated with L theobromae mycelium, both in the variety and in the
pattern by means of a wound. The evaluations were made 40 days after the inoculation and both the incidence and the
area of the necrotic lesions present were considered. For the incidence, the number of plants with necrotic lesions was
calculated and for the area of infection the ASSESS 9.1 image analysis program was used to determine the area of the
lesion (cm
2
). For the statistical analysis we used a completely randomized design (DCA) a Tukey mean comparison with
a level of signicance of 95 % (α = 0.05). The best results were obtained with the treatments with lower percentages of
incidence: oligosaccharide mannans, acibenzolar-S-methyl and aluminum fosetil, which were effective in the prevention
of the disease caused by L. theobromae.
Keywords: Acibenzolar-S-methyl; Red Globe; dieback; inductors of defense; mannans oligosaccharides.
1
Departamento Académico de Fitopatología, Facultad de Agronomía, Universidad Nacional Agraria La molina, Apartado postal 12-056- La Molina,
Lima, Perú. Email: Jomish28@hotmail.com
2
Departamento Académico de Fitopatología, Facultad de Agronomía, Universidad Nacional Agraria La molina, Apartado postal 12-056- La Molina,
Lima, Perú. Email: ccadenas@lamolina.edu.
1.Introducción
El cultivo de la vid (Vitis vinifera L.) es extensamente
cultivado en el mundo, en un área de 10 millones de hectáreas
aproximadamente. La vid se desarrolla tanto en regiones
templadas como tropicales, pero la mayoría de viñedos se
establecen en zonas de climas templados, concentrándose
la mayor cantidad en Europa. Constituye además una
de las actividades frutícolas de mayor importancia en el
Perú por su extensión, por su valor de producción y por
ser fuente de la materia prima que requiere la industria
vitivinícola nacional (Pearson, 2011). En la actualidad,
hay cerca de 29,777 hectáreas cultivadas con uva de mesa
para la exportación en la costa peruana, desde Moquegua
hasta Piura. Ica es la principal región productora con el
40,7 % del volumen nacional exportado, seguido de Piura
con el 23,7 % y Lima con 13,3% (MINAGRI, 2017). La
vid es afectada por diversas enfermedades que merman la
producción tales como la muerte regresiva (Lasiodiplodia
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theobromae), la enfermedad de Petri (Phaeoacremonium
spp. y Phaeomoniella chlamydospora), la Eutipiosis
(Eutypa lata), la Yesca (Fomitiporia mediterranea), entre
otros (Reynier, 1989).
L. theobromae (Pat.) Griffon and Maubl es la especie
tipo género Lasiodiplodia, el cual es un hongo que
fue descrito por primera vez hacia 1890 por Saccardo,
afectando frutos de cacao (Theobromae cacao) en ecuador
(Crous y Palm, 1999). Este hongo es cosmopolita y tiene
una gama de hospederos, incluidos monocotiledóneas,
dicotiledóneas y gimnospermas, especialmente de los
trópicos y subtrópicos. Es un hongo pleomórco y ubicuo,
por lo cual ha tenido más de un sinónimo (Abdollahzadeh
et al., 2010).
La muerte regresiva de la vid, causada por Lasiodiplodia
theobromae, ocasiona una reducción del crecimiento y un
decaimiento general de las plantas. Esta enfermedad afecta
principalmente a las plantas jóvenes causando enormes
pérdidas en nuevas plantaciones. En campos instalados con
vid es difícil curar las plantas infectadas con L. theobromae
debido a que este hongo se localiza en los tallos, tanto a
nivel de patrón como en el injerto, siendo la principal
fuente de inóculo el material de propagación infectado, por
tal motivo, durante el proceso de propagación de la vid en
vivero y en campo, se debe tomar medidas que eviten la
contaminación del material. (Mugnai et al., 1999; Poscoe
& Cotral, 2000).
Los antecedentes del potencial de ciertos productos
químicos y biológicos en la prevención de diversas
enfermedades, como aplicaciones exógenas de Ácido
salicílico (SA) y compuestos sintéticos como acibenzolar-
S-metil (ASM) han mostrado activar la resistencia
sistémica adquirida y ser efectivo contra una amplia gama
de patógenos y vinculado a la producción de proteínas
relacionadas a la patogénesis (PR). El SIR es inducido
comúnmente por Rizobacterias y en contraste con el SAR
la señalización esta mediada por el jasmonato y etileno
(Van Loon & Pieterse, 2006). Compuestos como mananos
oligosacaridos (PMO) en lo cual el principal activo es
extraído de la pared de Saccharomyces cerevisiae puede
activar también la resistencia en plantas (Costa et al.,
2010). Otros compuestos sintéticos como fosetil aluminio
han reportado una doble acción con un efecto directo
fungitóxico y un efecto indirecto involucrando la activación
de defensa sistémica en plantas. Solo existe evidencia clara
que los derivados de este compuesto pueden involucrar
en la formación de toalexinas y compuestos fenólicos
(Guest, 1984). Por ello, en esta investigación tuvo como
objetivo general determinar la ecacia en vivero de seis
productos inductores de defensa de naturaleza química:
Ácido fosforoso, fosetil de aluminio, fosto de potasio,
sulfato de cobre pentahidratado, mananos oligosacáridos,
acibenzolar S-metil, y dos de naturaleza biológica:
Bacillus subtilis, Trichoderma harzianum; utilizados como
inductores de defensa para prevenir la muerte regresiva
causada por L. theobromae en plantones de vid en vivero.
2.Materiales y métodos
El presente trabajo de investigación se realizó en el vivero
de la empresa Los Viñedos ubicado en el Kilómetro 201
de la Panamericana Sur, perteneciente al Fundo El Retiro
Lote 75, Distrito de Chincha Baja, Provincia de Chincha y
Departamento de Ica.
Para la obtención del inóculo, se seleccionaron plantas
madres de vid de la variedad Red Globe con síntomas de
muerte regresiva característicos de las infecciones con L.
theobromae. Los brotes de las plantas seleccionadas se
cortaron con una tijera de podar y fueron colocadas en
una bolsa de polipropileno y llevados al laboratorio para
realizar el aislamiento del patógeno. En el laboratorio
del vivero se seleccionaron las partes necróticas de las
ramas o brotes con su zona de avance asintomático, se
procedieron a lavarlas con agua potable y se cortaron
en porciones pequeñas de aproximadamente 5 mm de
diámetro abarcando la zona de avance de la enfermedad,
posteriormente se procedió a colocarlas en una solución de
alcohol al 96 % por 5 minutos con el propósito de eliminar
los contaminantes y microorganismos superciales y luego
se dejaron secar sobre papel toalla estéril.
Las porciones de tejido, desinfestadas y secas, se
sembraron en placas Petri conteniendo medio de cultivo
Extracto de Malta Agar (MEA) de la marca Merck
disponiendo 5 porciones en forma de cruz. Las placas
sembradas se colocaron por cuatro días en la incubadora a
una temperatura de 25 °C para permitir el crecimiento del
hongo (Santiago et al., 2015). Transcurrido el tiempo se
hicieron observaciones al microscopio estereoscopio para
determinar la presencia de las esporulaciones del hongo.
Se hicieron preparaciones microscópicas de las estructuras
fructicantes formadas en las colonias en láminas porta y
cubreobjetos las cuales fueron observadas al microscopio
compuesto para la identicación correspondiente. Se
utilizó las claves de Barnett & Hunter (1996) para
corroborar el género taxonómico; y la clave de Sutton
(1980) y el descriptor de la Commonwealth Mycological
Institute (CMI) para la corroboración a nivel especíco
El hongo identicado se inoculó en plantones de vid para
determinar la patogenicidad de L. theobromae aislado de
plantas con síntomas característico de la enfermedad, en
la cual se utilizó el mismo material vegetal y metodología
empleado en los tratamientos.
Para la fase de vivero se utilizaron estacas enraizadas
de vid sanos de la variedad Red Globe injertadas sobre
patrón Harmony con una edad de cinco meses y una altura
promedio de 50 cm, que previamente fueron pasadas por
un proceso de termoterapia a temperatura de 53 °C por un
tiempo de 30 minutos. Se instalaron en diez bandejas con
sustrato estéril compuesta por una mezcla de coco, humus
y pajilla de arroz en las proporciones (1-1-1/2), regadas
por sistema de goteo. Los productos que se utilizaron en
los tratamientos en el presente trabajo de investigación
fueron ocho en total, seis de naturaleza química y dos de
naturaleza biológica, incluyendo testigo sin inocular y
testigo inoculado, los cuales se presentan en la Tabla 1.
Uso de inductores de defensa en la prevención de infecciones ocasionadas por Lasiodiplodia theobromae, en plantones de vid (Vitis vinifera) en Perú
Julio - Diciembre 2018
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Tabla 1. Tratamientos de productos químicos y biológicos
contra L. theobromae, en fase de vivero
Tratamiento
Ingrediente
activo
Dosis Aplicación
1
Acido
fosforoso
1,0 L/200 L de agua Drench
2
Fosetil de
Aluminio
0,5 kg/200 L de agua Foliar
3
Fosto de
potasio
0,5 L/ 200 L de agua Foliar
4
Sulfato
de cobre
pentahidratado
0,4 L/200 L de agua Foliar
5
Mananos
oligosacáridos
0,5 L/200 L de agua Foliar
6
Acibenzolar
S-methyl
10,0 g/200 L de agua Foliar
7
Trichoderma
harzianum
5g/L de agua Foliar
8
Bacillus subti-
lis (0,2%)
5g/L de agua Foliar
9
Testigo sin
inocular
Agua sola Foliar
10
Testigo
inoculado
Agua sola
Las aplicaciones de los productos químicos y biológicos
de los tratamientos se iniciaron 2 meses después de la
injertación considerando como el día cero. Estas fueron
realizadas en tres oportunidades en intervalos de diez
días entre aplicaciones cinco días después de la última
aplicación se inocularon las plantas de cada tratamiento
con el hongo L. theobromae, previamente aislado e
identicado. Se utilizó un asperjador de la marca Arsus
con capacidad de 2 litros, los ingredientes activos fueron
pesados en la cantidad equivalente a la dosis comercial
y mezclados con agua en una cantidad de 360 ml. por
tratamiento con adición de un surfactante siliconado para
disminuir la tensión supercial del agua permitiendo un
mejor mojamiento, para aplicación en suelo se calculó el
gasto de agua para evitar perdida de producto, se realizó
un vaciado al sustrato en una cantidad de 400 ml. de agua.
En cada plantón de vid se realizaron dos heridas
circulares de 5 mm de diámetro con un sacabocado
previamente desinfectado, haciendo una presión leve en
el tallo para extraer la porción de corteza, una en la zona
del patrón ubicado en una distancia media entre la base
y la zona injerto y la otra en la zona del injerto ubicado
en una distancia donde el grosor fue 1cm aproximado. En
el área de tejido expuesto se colocó una rodaja de 5 mm
de medio MEA conteniendo el crecimiento de 4 días de
edad de micelio de L. theobromae. Las heridas inoculadas
se cubrieron con un trozo pequeño de algodón humedecido
con agua destilada estéril para generar humedad al hongo
y nalmente se envolvió con cinta de paralm, esta
metodología fue tomada como referencia de los trabajos
en vid realizados por Urbez-Torres et al. (2008). Los
plantones inoculados se dejaron puestas dentro de un
tinglado del vivero hecho de malla Raschel hasta ver la
observación de los síntomas secundarios y primarios; así
como de la presencia de los signos correspondientes.
Transcurridos 40 días después de la inoculación, se
realizaron las evaluaciones de los plantones en todos los
tratamientos. Los parámetros que se evaluaron fueron: a.
Incidencia, contando el número de plantas que mostraron
síntoma visual de pudrición externa en avance en los tallos
que fueron ocasionados directamente por el patógeno
inoculado; b. Pudrición externa en los tallos, para lo cual
se efectuó un raspado de la supercie de los tallos desde
los puntos de inoculación hacia sus cuatros lados (superior,
inferior, izquierda y derecha) exponiendo el tejido cortical
afectado; evaluándose tanto de la zona del patrón como
en la del injerto. Se calcó el área afectada colocándole
papel celofán ceñido al tallo, posteriormente estos dibujos
fueron copiados a un papel blanco y para determinar
el área (cm
2
) infectada estos dibujos fueron llevadas
al gabinete donde se utilizó el programa de análisis de
imagen para la cuanticación de la enfermedad en plantas
(ASSESS 9.1); c. Pudrición interna de los tallos, después
del raspado supercial de los tallos, se realizaron cortes
longitudinales para medir el avance de la necrosis por los
haces vasculares, tanto hacia arriba como hacia abajo del
punto de inoculación, y para esta evaluación se utilizó una
regla milimetrada. d. Porcentaje de inhibición del hongo,
la cual se utilizó la fórmula de % de inhibición = {[Testigo
inoculado – Tratamiento) / Testigo inoculado)] x 100}.
El diseño experimental que se empleó fue el
completamente al Azar (DCA), con 10 tratamientos y 12
repeticiones. Para las variables evaluadas se realizaron
Análisis de homogeneidad de variancia y normalidad. La
Prueba de comparación de medias de Tukey, consideró
un nivel de conanza del 95 % (α= 0,05), para lo cual
se utilizó el Statistical Analisys Software (SAS Institute,
2004), versión 9.1.
3. Resultados y discusión
En la prueba de patogenicidad se observó plantones
con pérdida de vigor, reducción de las distancias de los
entrenudos, hojas cloróticas y el signo la cuales fueron
picnidias con la presencia de cirrus, síntomas y signos que
corresponde a los reportados en los trabajos realizados por
Urbez-Torres et al. (2008).
Los resultados de las evaluaciones de incidencia de
la enfermedad muestran que los tratamientos: Testigo
inoculado, fosto de potasio, B. subtilis, ácido fosforoso,
y T. harzianum, presentaron un 100 % de incidencia de la
enfermedad tanto en el patrón como en el injerto.
En el tratamiento con sulfato de cobre pentahidratado
se observó una planta sin infección en la zona del injerto,
pero si con síntoma de infección en el patrón. En el
tratamiento con fosetil aluminio solamente dos plantas no
tuvieron síntomas de infección en la zona del injerto, pero
si todos en el patrón. Para los tratamientos con mananos
oligosacáridos y testigo sin inocular no se observaron
síntomas de infecciones, ni en la zona del injerto ni en
el patrón, y por último el tratamiento con acibenzolar-S-
metil solo se evidenció una planta con infección en la zona
patrón (Tabla 2).