Concentración y eliminación de orfenicol y enrooxacina en músculo, piel
y hueso de juveniles de Tilapia Nilótica (Oreochromis niloticus)
Tissue, skin and bone concentration and elimination of orfenicol and enrooxacin
in Nile Tilapia Juveniles (Oreochromis niloticus)
DOI:
Autor de correspondencia (*): Fernando Santiago Galecio Regalado. Email: [email protected]
© Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima, Perú.
Forma de citar el artículo: Carranza et al., 2019. Concentración y eliminación de orfenicol y enrooxacina en
músculo, piel y hueso de juveniles de Tilapia Nilótica (Oreochromis niloticus). Anales Cientícos 80 (1): 160- 167
(2019).
María Alejandra Carranza Dávila
1
; Fernando Santiago Galecio Regalado
1*
;
Beatriz Elena Angeles Escobar
1
1
Universidad Nacional Agraria La Molina, Av. La Molina s/n, La Molina, Facultad de Pesquería. Email: mariacadv@
Recepción: 25/10/2018; Aceptación: 05/01/2019
Resumen
Se evaluó la concentración y tiempo de eliminación en músculo, piel y hueso de juveniles
de tilapia Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758) de dos antibióticos de amplio uso en la
acuicultura: orfenicol y enrooxacina. Los juveniles de tilapia con un peso promedio de
40 g fueron medicados vía oral con orfenicol (5 mg/kg de peso vivo) y enrooxacina (10
mg/kg de peso vivo) durante 15 días consecutivos, evaluando su concentración en músculo,
piel y hueso; el día 15 se suspendió la alimentación medicada, alimentándolos por 15 días
más con el alimento control y evaluando el tiempo de residualidad de los antibióticos en ese
período. La máxima concentración en piel, músculo y hueso alcanzada con orfenicol fue
de 3,46 μg/g, 6,62 μg/g y 5,44 μg/g, respectivamente, en un tiempo de 10 días para piel y 15
días para músculo y hueso; mientras que la máxima concentración en piel, músculo y hueso
alcanzada con enrooxacina fue de 5,62 μg/g, 5,62 μg/g y 7,18 μg/g, respectivamente, en
un tiempo de 10 días para todos los tejidos. No se encontró diferencia signicativa entre las
concentraciones antes mencionadas de los tejidos de tilapia con relación a los tratamientos
con antibióticos. Las concentraciones de los antibióticos en estos tejidos se mantuvieron
por encima de las concentraciones mínimas inhibitorias (MIC), requiriéndose de 7 días para
garantizar que los residuos de orfenicol y enrooxacina fueran menores que los límites
máximos permisibles por la Unión Europea y por el Perú (≤ 0,1 ppm en los tejidos - EMEA).
Palabras clave: orfenicol; enrooxacina; concentración; tiempo de eliminación; tilapia.
Abstract
The present study evaluated the concentration and the elimination time in muscle, skin and
bone of juvenile tilapia Oreochromis niloticus of two antibiotics broadly used in aquaculture:
orfenicol and enrooxacin. The mean weight of tilapia juveniles was 40 g, they received
oral medication with orfenicol (5 mg/kg BW/d) and enrooxacin (10 mg/kg BW/d) for
15 consecutive days, then it was determined the concentration in muscle, skin and bones.
After the 15
th
day the medication was suspended, and started feeding them with control
Análes Cientícos
ISSN 2519-7398 (Versión electrónica)
Website: http://revistas.lamolina.edu.pe/index.php/acu/index
Anales Cientícos 80 (1): 160-167 (2019)
161
Carranza et al. / Anales Cientícos 80 (1): 160-167 (2019)
Enero - Junio 2019
food for 15 more days, evaluating the elimination time of the antibiotic during that period.
The peak drug concentration in skin, muscle and bone with orfenicol was 3,46 μg/g, 6,62
μg/g and 5,44 μg/g respectively in a 10 days period for the skin, while in muscle and bone
was 15 days. The peak enrooxacin concentration on skin, muscle and bone was 5,62 μg/g,
5,62 μg/g and 7,18 μg/g respectively, reaching it in 10 days for every tissue. No signicant
dierence was found between the concentrations mentioned before in the tissues of tilapia
among treatments with antibiotics. The drug concentrations in this tissues remained above
the minimal inhibitory concentrations (MIC), requiring 7 days of withdrawal time to ensure
that the residues of orfenicol and enrooxacin were less than the maximal residue limit of
tolerance established by the European Union and Perú. (≤ 0,1 ppm antibiotic present in the
tissue, EMEA)
Keywords: orfenicol; enrooxacin; concentration; elimination time; tilapia.
1. Introducción
En los sistemas de producción animal, como
es el caso de la acuicultura, las afecciones
parasitarias y bacterianas son consideradas
como causa importante de pérdidas de la
productividad, debido a daños tales como
mortalidad de los peces, reducción de los
niveles de producción y productividad,
alteraciones reproductivas y altos costos
en el control de estas enfermedades (San
Martín et al., 2010).
El uso de los antibióticos terapéuticos en
los sistemas de cultivo acuáticos surge como
una de las alternativas para contrarrestar las
enfermedades infecciosas, las cuales pueden
ser producidas por un inadecuado manejo
técnico (los peces están sometidos a estrés),
su alta densidad en un espacio limitado,
condiciones ambientales, etc., que permiten
el desarrollo de los patógenos (Bermúdez
y Espinosa, 2010; Wendover, 2009). Sin
embargo, los residuos de medicamentos
veterinarios como los antibióticos presentes
en los alimentos de origen animal tales como
los peces, generan productos de baja calidad
y constituyen un riesgo para la salud de los
consumidores.
Varias experiencias demuestran que el
consumo de estos productos es nocivo para la
salud del consumidor respecto a su potencial
impacto (Gardner, 1978; Grossklaus, 1982;
Allison, 1985; Dölz, 1992; Millanao et
al., 2011) ya que puede producir toxicidad
aguda o crónica, efectos mutagénicos y
carcinógenos, desórdenes en el desarrollo
corporal, reacciones alérgicas y fenómenos
de resistencia bacteriana, entre otros efectos
(Doyle, 2006).
Las nuevas tendencias mundiales sobre
la seguridad alimentaria han impulsado
que países como Japón y Estados Unidos,
así como los países europeos, principales
importadores de productos acuícolas,
establezcan nuevos requerimientos de
seguridad como son los límites máximos de
residuos (LMR) de antibióticos permitidos
para los productos acuícolas que ingresan
por sus fronteras. Esto debido a que muchos
cultivos acuícolas utilizan antibióticos en
alguna etapa del cultivo, sin encontrarse
debidamente regulados en los países
productores (Montoya y Reyes, 2002;
Águila, 2000).
En el presente estudio se evaluó la
acumulación y el tiempo de eliminación de
dos antibióticos comerciales (orfenicol y
enrooxacina) en juveniles de tilapia gris,
O. niloticus.
2. Materiales y métodos
El trabajo experimental se realizó en las
instalaciones del Centro de Investigación
Piscícola de la Facultad de Pesquería
(CINPIS) de la Universidad Nacional
Agraria La Molina, ubicado en la Av. La
Molina s/n (12°4’57”S 76°56’49”W).
Se emplearon tres estanques de concreto
de 3m
3
cada uno, divididos en tres, con
mallas de 9 mm con marco de madera para
las réplicas de cada tratamiento. Se colocaron
81 juveniles de tilapia por tratamiento
distribuidos en tres réplicas, correspondiendo
a cada uno 27 peces. El material biológico
fue tilapia nilótica (Oreochromis niloticus)
con un peso promedio de 40 ± 7,2 gr. Los
Concentración y eliminación de orfenicol y enrooxacina en músculo, piel y hueso de juveniles de Tilapia
Nilótica (Oreochromis niloticus)
162
Enero - Junio 2019
tratamientos a evaluar consistieron en probar
tres dietas experimentales, basadas en una
dieta comercial con 42 % de proteína; para
ello, se procedió a preparar una dieta basal
de 150 kg, la misma que se dividió en tres
partes iguales (50 kg c/u), una de estas tres
partes fue destinada como dieta control,
a la que no se agregó ningún antibiótico.
Posteriormente, se adicionó a cada una
de las partes restantes los antibióticos a
evaluar (orfenicol y enrooxacina), en las
cantidades que se detallan en la Tabla 1 y,
nalmente, se procedió al peletizado de cada
uno de los tratamientos, siendo sometidos
a las mismas condiciones de proceso. Una
vez terminadas las dietas experimentales, se
tomó una muestra del alimento medicado
para su posterior análisis de laboratorio, para
detectar la concentración del antibiótico en
el alimento.
Tabla 1: Concentración, dosis, laboratorio
de origen y nombre comercial de los
antibióticos enrooxacina y orfenicol
Antibiótico Enrooxacina Florfenicol
Nombre comercial Enro-blend Flor-blend
Laboratorio Avimex Avimex
Cantidad agregada
por 50 kg (g)
11,9 6,4
Cantidad del
antibiótico
(mg x kg de
alimento)
238 128
Concentración del
antibiótico
70% 65%
Concentración
(mg antibiótico/kg
de alimento)
166,6 83,2
Dosis
(mg antibiótico/kg
de peso vivo)
10 mg/kg 5 mg/kg
Se alimentó a los peces ad libitum.
La ración diaria fue distribuida con una
frecuencia de tres veces al día (9:00, 12:00
y 3:00 p. m.), en el mismo horario se
midieron los parámetros de temperatura en
la parte media del tirante de agua de los tres
estanques. El oxígeno fue medido con un
equipo marca YSI (3 veces por semana, en
tres horarios: 09:00, 12:00 y 15:00) y el pH
(2 veces por semana, 09:00, 12:00 y 15:00)
con un potenciómetro marca Waterproof.
Los muestreos fueron diarios tomando
tres individuos elegidos al azar los cuales
fueron sacricados con un corte rápido
de la médula espinal. Posteriormente, se
retiraron la cabeza, vísceras y cola y se
obtuvo de la parte media de cada individuo
tres cortes tipo medallones que contenían
músculo, piel y hueso, colocándolos
individualmente en bolsas selladas e
identicadas por tratamiento. Las bolsas
fueron colocadas en un envase con hielo
hasta su llegada al laboratorio de análisis.
Los valores de las concentraciones de
antibiótico en las muestras fueron realizados
en el laboratorio Bioservice, utilizando
el método microbiológico, según United
States Department of Agriculture (2007),
el cual consistió en realizar pruebas en
placas sembradas con esporas de bacterias
Bacillus stearothermophilus las cuales
presentan sensibilidad a los antibióticos
empleados. El laboratorio realizó un pool
con todos los cortes obtenidos, separando la
piel, el músculo y el hueso de cada corte, de
modo que se pudiera obtener los datos por
separado.
Durante esta fase, se procedió a alimentar
a los peces con las dietas medicadas, de
modo que se pudiera evaluar la acumulación
de los medicamentos suministrados a través
de los muestreos, lo cuales fueron tomados
los días 0, 1, 5, 10 y 15.
Este análisis permitió determinar en qué
momento se alcanzó la mayor concentración
de antibiótico en el cuerpo y cuánto del
medicamento suministrado se acumuló en
piel, músculo y hueso de los organismos
tratados.
Una vez concluida la primera fase
experimental, se suspendió la entrega de las
dietas medicadas y se procedió a continuar
con la misma estrategia de alimentación,
utilizando un alimento comercial de 42%
de proteína. Para determinar el tiempo de
residualidad del antibiótico, se tomaron
muestras de piel y músculo y otras muestras
de huesos en los días 16, 23 y 30.
Se utilizó un Diseño de Bloques
Completamente al Azar (DBCA) para tres
tratamientos, con cinco bloques para la
primera fase, y para tres tratamientos, con
tres bloques para la segunda fase, ambas
con 3 repeticiones y 27 peces por repetición.
Se empleó el programa informático SAS
(Sistema de análisis estadístico) mediante el
163
Carranza et al. / Anales Cientícos 80 (1): 160-167 (2019)
Enero - Junio 2019
cual los datos fueron sometidos al análisis de
variancia (ANVA) y la comparación de las
medias de los tratamientos se hizo utilizando
la prueba de comparaciones múltiples de
Tukey a un nivel de α = 0,05 (Calzada,
1987).
3. Resultados y discusión
Durante la etapa experimental, la temperatura
promedio diaria del agua osciló entre 24 ºC
y 28 ºC. Mientras que el oxígeno disuelto
promedio fue de 7,86 ± 2,3. Finalmente, los
valores de pH registrados en el experimento
presentaron un grado neutro a ligeramente
alcalino con valores promedios de 7,7 a 8,1.
Los peces fueron alimentados ad libitum
con tasas de consumo de 1,6 – 1,8 g/ día.
La concentración de orfenicol hallada en la
dieta fue de 0,118 mg/g, en tanto la dieta con
enrooxacina presentó un valor de 0,101
mg/g (Tabla 2). Las dosis administradas
variaron de 85% al 91% de la dosis objetiva
(5 mg orfenicol/kg y 10 mg enrooxacina/
kg), durante los 15 días que duró la primera
fase del experimento.
Tabla 2: Resultado del consumo y las
concentraciones de las muestras tomadas de
los alimentos medicados
Antibiótico
evaluado
Consumo
Alimento/
pez/ día
Concentración
(mg) antibiótico
por gramo de
alimento
Florfenicol 1,6 – 1,8 g 0,118
Enrooxacina 1,6 – 1,8 g 0,101
Control 1,6 – 1,8 g 0,000
En la Figura 1 se observa el
comportamiento de las concentraciones
del orfenicol alcanzadas durante el
tiempo de medicación, encontrando que las
concentraciones máximas que se alcanzaron
en la piel, músculo y hueso de juveniles
de tilapia fueron de 3,46 μg/g, 6,62 μg/g
y 5,44 μg/g, respectivamente. Dichas
concentraciones se alcanzaron a los 10
días después de iniciado el tratamiento con
orfenicol para piel y 15 días para el músculo
y hueso, con una temperatura promedio en el
agua de 26 ºC.
Para el caso del tratamiento evaluado
con el antibiótico enrooxacina, cuyos
resultados se muestran en la Figura 2, se
observa que las concentraciones máximas
alcanzadas en la piel, músculo y hueso de las
tilapias fueron de 5,62 μg/g, 5,62 μg/g y 7,18
μg/g, respectivamente, siendo el tiempo en
que alcanzaron la máxima concentración a
los 10 días de iniciada la administración del
alimento medicado, 5 días antes de terminar
el tiempo de medicación.
De la comparación entre las
concentraciones de los antibióticos para
piel, músculo y hueso que se presentan en
la Figura 3, se observa que los valores de
concentración de enrooxacina superan a
las de orfenicol en los tres tejidos, debido
a la dosis entregadas, sin embargo no se
encontró diferencia signicativa entre las
concentraciones de piel, músculo y hueso
entre los tratamientos con antibióticos, pero
sí con el tratamiento control para la primera
fase del experimento.
Las concentraciones del antibiótico
orfenicol, después de 24 horas de
nalizada la administración de la dieta
medicada, presentan valores en piel,
músculo y hueso de 1,49 μg/g, 1,09 μg/g
y 3,86 μg/g, respectivamente, siendo estas
concentraciones superiores a los límites
máximos permisibles (LMP) establecidos
por la European Agency for the Evaluation
of Medicinal Products (EMEA).
Como se observa en la Figura 2, el día 16
las concentraciones de orfenicol alcanzadas
en piel, músculo y hueso fueron eliminadas
en un 57%, 83% y 30%, respectivamente.
Esto es, 24 horas después de retirada la
alimentación con los antibióticos, se aprecia
un rápido descenso de las concentraciones
máximas alcanzadas del orfenicol, siendo
la concentración en el músculo la que
se elimina más rápido, mientras que la
eliminación en hueso fue la más lenta.
Para el caso del tratamiento con
enrooxacina, las concentraciones de
este antibiótico después de 24 horas de
nalizada la administración de la dieta
medicada presentan valores en piel, músculo
y hueso de 3,12 μg/g, 4,37 μg/g y 2,81 μg/g,
respectivamente, siendo la concentración
en músculo superior al LMP establecido
por la EMEA para la enrooxacina, que es
de 0,1 µg/gr en músculo, mientras que los
LMP para piel y hueso no se encuentran
especicados.
Concentración y eliminación de orfenicol y enrooxacina en músculo, piel y hueso de juveniles de Tilapia
Nilótica (Oreochromis niloticus)
164
Enero - Junio 2019
0
1
2
3
4
5
6
7
8
0 1 5 10 15 16 23 30
Días de muestreo
Concentraciones en
μg/g
Piel Músculo Hueso
Figura 1: Concentración del orfenicol en la piel, músculo y hueso de tilapia (Oreochromis
niloticus) administrado vía oral por un periodo de 15 días a una concentración de 5mg/kg de
alimento
0
1
2
3
4
5
6
7
8
0 1 5 10 15 16 23 30
Días de muestreo
Concentraciones en
μg / g
Pi el Músculo Hues o
Figura 2: Concentración de la enrooxacina en la piel, músculo y hueso de tilapia
(Oreochromis niloticus) administrado vía oral por un periodo de 15 días a una concentración
de 10 mg/kg de alimento
165
Carranza et al. / Anales Cientícos 80 (1): 160-167 (2019)
Enero - Junio 2019
Figura 3: Concentración de los antibióticos enrooxacina (5mg/kg de alimento) y orfenicol
(10mg/kg de alimento) administrados vía oral a tilapias (O. niloticus) por un periodo de 15
días en piel (A), músculo (B) y huesos (C)
Concentración y eliminación de orfenicol y enrooxacina en músculo, piel y hueso de juveniles de Tilapia
Nilótica (Oreochromis niloticus)
166
Enero - Junio 2019
Las concentraciones alcanzadas en
piel, músculo y hueso con el antibiótico
enrooxacina, disminuyeron en un 23%,
22% y 59%, respectivamente, 24 horas
después de retirada la alimentación con
el antibiótico. Según lo observado, la
eliminación de esta sustancia en hueso fue
más rápida que con el orfenicol donde las
concentraciones de antibiótico en hueso
fueron eliminadas más lentamente (30%),
caso contrario se presentó para la piel y el
músculo siendo su eliminación más lenta
que con el orfenicol (piel 57% y músculo
83%).
De la Figura 3, se observa que
las concentraciones alcanzadas con
enrooxacina, al igual que con el tratamiento
de orfenicol, el tiempo de residualidad y/o
eliminación fue entre 2 a 7 días después
de suspender el suministro de alimento
medicado, encontrando concentraciones
musculares del antibiótico por debajo de 0,1
ppm, nivel tolerado por la EMEA y Sanipes
para muestras de tilapia cultivada y tratada
con enrooxacina.
No se encontraron diferencias
signicativas entre las concentraciones
promedio del periodo de retiro entre los
tratamientos evaluados, ni tampoco con
el tratamiento control, siendo el tiempo
de residualidad y/o eliminación para los
tratamientos con orfenicol y enrooxacina
de 7 días.
Las concentraciones alcanzadas con los
antibiótico orfenicol y enrooxacina,
superan a las CMI de la mayoría de bacterias
como Streptococcus, Rickettsias vibrio,
Pseudomonas y Aeromonas, pudiendo
considerarse a estas concentraciones seguras
para un adecuado tratamiento (Águila,
2000). Esto indicaría que ambos antibióticos
pueden ser efectivos contra las enfermedades
causadas por las bacterias antes mencionadas,
excepto Streptococcus para el caso de
enrooxacina y Rickettsias para el caso de
orfenicol. Las dosis aplicadas de orfenicol
de 5 mg/kg de peso vivo por un tiempo de al
menos 15 días y a una dosis de 10 mg/kg de
peso vivo por un periodo de 10 días para el
caso de enrooxacina, lo cual permitiría que
ambos antibióticos por separado alcancen
las concentraciones máximas ya sea en la
piel, músculo y hueso del pez, inhibiendo la
acción bacteriana.
El uso de antibióticos de amplio espectro
como el orfenicol o la enrooxacina debe
aplicarse ante la presencia comprobada
de un determinado patógeno, en las
dosis recomendadas anteriormente.
Posteriormente, se debe tener un tiempo
de eliminación que asegure su inocuidad,
en este caso lo recomendado para ambos
antibióticos es de al menos siete días con una
temperatura del agua de 26 ºC, según Bravo
y Millanao (2010), el periodo de excreción
del fármaco en el pez es dependiente de la
temperatura del agua.
4. Conclusiones
Las concentraciones alcanzadas en juveniles
de tilapia en 15 días de alimentación
medicada con una dosis de 5 mg de
orfenicol/kg de peso vivo, fueron de 3,46
μg/g en piel, 6,62 μg/g en músculo y 5,44
μg/g en hueso.
Los valores de las concentraciones
alcanzadas en juveniles de tilapia en 15 días
de alimentación medicada con una dosis de
10 mg de enrooxacina/kg de peso vivo,
fueron de 5,62 μg/g en piel, 5,62 μg/g en
músculo y 7,18 μg/g en hueso.
No se encontraron diferencias
signicativas entre los valores hallados en
piel, músculo y hueso para los tratamientos
con antibióticos orfenicol y enrooxacina,
pero sí con el tratamiento control.
A los siete días de retirar el alimento
medicado con orfenicol y enrooxacina no
se encontraron diferencias signicativas con
el tratamiento control de juveniles de tilapia.
Dichos valores son considerados seguros
para el consumo humano (≤ 0,1 ppm según
EMEA).
5. Literatura citada
Allison, J. 1985. Antibiotic residues in milk.
J. Br. Vet 141(1): 9-16.
Águila, C.M. 2000. Aplicación de una
prueba microbiológica de detección
de residuos de antibióticos en peces
usando suero sanguíneo y músculo.
Tesis de grado en Licenciado en
medicina veterinaria, Universidad
Austral de Chile.
Bermúdez, M.; Espinosa, A. 2010. Empleo
de antibióticos en la acuicultura: un
167
Carranza et al. / Anales Cientícos 80 (1): 160-167 (2019)
Enero - Junio 2019
panorama general de las repercusiones
ambientales y económicas. Revista
Mundo acuícola y pesquero. Año
7(43).
Bravo, S.; Millanao, A. 2010. Uso
responsable de antimicrobianos en la
acuicultura. Revista Mundo acuícola
y pesquero. Año 10 (70).
Calzada Benza, J. 1987. Métodos estadísticos
para la investigación. Universidad
Nacional Agraria La Molina, Lima,
Perú.
Dölz, H. 1992. Consideraciones sobre
el empleo de la quimioterapia
antibacteriana en salmonicultura.
Actualidad Farmacéutica 49(2): 7-9.
Doyle, M.E. 2006. Veterinary drug residues
in processed meats - potential health
risk. Food Research Institute (FRI
Briengs).
Gardner, P. 1978. Antibiotics in animals feed:
the need for better epidemiologic
studies. Journal of infectious Diseases
138: 101-104.
Grossklaus, D. 1982. Inspección sanitaria de
la carne de ave. Acribia, Zaragoza.
Millanao, A.; Barrientos, M.; Gómez, C.;
Tomova, A.; Buschman, A.; Dölz,
H.; Cabello, F. 2011. Uso inadecuado
y excesivo de antibióticos: Salud
pública y salmonicultura en Chile.
Rev. Med. Chile 139: 107-118.
Montoya., N.; Reyes, E. 2002. Acumulación/
eliminación de oxitetraciclina en
el camarón blanco, Litopenaeus
vannamei, y su residualidad en
dietas articiales. Tesis de pre-grado.
Universidad Politécnica del Litoral,
Facultad de Ciencias Marinas,
Ecuador. 65 p.
San Martin, B.; Tadaishi, R.; Gallardo, A.;
Medina, P. 2010. Manual de buenas
prácticas en el uso de antibióticos y
antiparasitarios en la salmonicultura
chilena. Laboratorio de Farmacología
Veterinaria. Facultad de Ciencias.
Wendover, N. 2009. Manejo de la salud de
la tilapia en sistemas comerciales
complejos. Intervet/Shering-Plough
Animal Health, Singapur.
