ESTANDARIZACIÓN DE UN PROTOCOLO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ABSCÍSICO MEDIANTE LA TÉCNICA DE ELISA COMPETITIVO
DOI:
https://doi.org/10.21704/rea.v16i1.898Keywords:
Estrés hídrico, acido abscísico (ABA), Ensayo de Inmuno absorbancia Ligado a Enzimas (ELISA), MAC 252, agroecologíaAbstract
La respuesta fisiológica más resaltante de las plantas frente al estrés hídrico por sequía es la síntesis de la fitohormona Acido abscísico (ABA). Una solución a los cambios ambientales es lograr un mejor uso eficiente de agua, por ello la predicción en la magnitud de la señalización de ABA puede tener gran importancia en la agroecología; además, permitirá la optimización de las técnicas de riego en zonas áridas que necesitan de cultivos que limiten el uso de éste recurso natural. Hasta el momento, la metodología más específica y confiable para su cuantificación es el Ensayo de Inmuno-absorbancia Ligado a Enzimas (ELISA por sus siglas en inglés) del tipo competitivo indirecto. Es por esta razón que el presente estudio utilizó esta técnica con la finalidad de establecer un protocolo reproducible y accesible que permita determinar concentraciones de ABA. La metodología consistió en evaluar diferentes concentraciones de los anticuerpos y antígeno, así como del sustrato; siendo las condiciones óptimas que permitieron obtener la mejor sensibilidad y reproducibilidad del protocolo las especificadas a continuación: cobertura con el conjugado ABABSA 300 ng/ml, MAC 252 (anticuerpo monoclonal específico para ABA) a 1:80 000, Antirat IgG a 1:2 000 y sustrato PNPP en 1 mg/ml. Obteniéndose al final ecuaciones lineales cuyos valores de R2 se presentaron en un rango de 0.95-0.99 así como diferencias significativas entre los controles positivos y negativos.
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